正清学术青藤碱抑制人卵巢癌SKOV3

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近年来研究发现,青藤碱可抑制多种恶性肿瘤增殖、侵袭和转移,如乳腺癌、肺癌和骨肉瘤等。然而目前尚无青藤碱影响人卵巢癌细胞增殖和侵袭的相关报道。为此我们观察了青藤碱对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响并探究及其分子机制。

1材料

人卵巢癌SKOV3细胞购自中国科学院细胞库;人正常卵巢上皮IOSE80细胞购自上海拜力生物科技有限公司。青藤碱(批号-,纯度≥99.5%)购自中国药品生物制品检定所;胎牛血清和RPMI-培养基购自Hyclone;CCK-8试剂盒、碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色液、结晶紫染色液、RIPA裂解液和ECL化学发光试剂盒购自碧云天生物技术有限公司;Matrigel和Transwell小室购自Corning;小鼠抗人细胞周期蛋白(cyclin)A、cyclinD1、Ecadherin、基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)和β-actin单克隆抗体及辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG购自SantaCruz。

2方法

2.1细胞培养人卵巢癌SKOV3细胞和人正常卵巢上皮细胞IOSE80采用含10%胎牛血清的RPMI-培养液中,在37℃、5%CO2条件下培养。当细胞融合度达到90%时,以0.25%的胰蛋白酶消化,按1∶3的比例传代。

2.2青藤碱工作液的配制将青藤碱溶于无血清RPMI-培养基中,配制成浓度为50mmol/L的贮存液,避光,4℃保存备用。使用时用细胞培养液将其分别稀释至0.25、0.5、1、2和4mmol/L。对照(control)组使用无药的细胞培养液。

1青藤碱对SKOV3和IOSE80细胞活力的影响

CCK-8检测结果显示,随着青藤碱作用浓度和作用时间的增加,SKOV3细胞活力逐渐降低(P0.05),青藤碱作用SKOV3细胞48h的IC50为2.12mmol/L;与此同时,虽然人正常卵巢上皮IOSE80细胞活力也有所下降(P0.05),但青藤碱作用SKOV3细胞48h的IC50高达17.35mmol/L。这表明与IOSE80细胞相比,青藤碱对卵巢癌SKOV3细胞活力具有较强的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,见图1、2。

2青藤碱对SKOV3细胞周期分布的影响

流式细胞术检测结果显示,分别经0.25、0.5和1mmol/L青藤碱处理48h后,G0/G1期和S期的细胞比例逐渐升高(P0.05),G2/M期的细胞比例逐渐下降(P0.05)。这表明青藤碱可剂量依赖地诱导SKOV3细胞发生G0/G1期和S期阻滞。

3青藤碱对SKOV3细胞迁移和侵袭的影响

Transwell实验结果显示,经0.25、0.5和1mmol/L青藤碱处理12h后,SKOV3细胞的迁移率和侵袭率均逐渐降低(P0.05),这表明青藤碱可抑制SKOV3细胞迁移和侵袭,且呈剂量依赖性。

4青藤碱对cyclinA、cyclinD1、E-cadherin和MMP-9蛋白水平的影响

Westernblot实验的结果显示,经0.25、0.5和1mmol/L青藤碱处理24h后,SKOV3细胞中的cyclinA、cyclinD1和MMP-9蛋白水平显著降低(P0.05),E-cadherin蛋白水平显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性。

一直以来,青藤碱因具有抗炎、抗风湿和免疫抑制等作用在临床上用于治疗类风湿性关节炎等自身免疫性疾病近年来,青藤碱的抗肿瘤作用日益受到人们的