最新试验牛樟芝抗肝癌的效应与机制研究

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全球每年新确诊的恶性肿瘤中约有9.2％为肝癌，在肝癌的新发病例中，亚洲约占70％，其中，我国的肝癌发病率居首位，且我国HCC患者的年死亡人数占全球HCC患者死亡人数的55％左右。那些进展为HCC的患者几乎都在12个月内死亡，证明HCC进展极快且预后极差，因此，急需寻找有效的治疗药物。

　　ANCA-E-D是牛樟芝的二氯甲烷提取物。台湾当地居民一直用牛樟芝来治疗食物和药物中毒、腹泻、腹痛、皮肤瘙痒、改善免疫和肝功能等，而现代药理也证实，牛樟芝具有调节免疫、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化和神经保护等作用。

　　研究发现，牛樟芝与中药灵芝同属于多孔菌科的真菌，生长习性和性味相近，生物活性成分不同，尤其是牛樟芝的生物活性物质种模拟单一种类的灵芝更多，且萜类和多醣等含量更高，故而近年来，牛樟芝的抗肿瘤和免疫调节等功效成为研究的热点。

　　我们认为牛樟芝具有扶正补虚和抗癌解毒的双重功效，是一种潜在的特异性的抗癌中药。已有的研究证实，牛樟芝可以抑制肺癌、结肠癌、卵巢癌等多种肿瘤的生长。

　　本研究中，我们利用SMMC-肝癌细胞株，通过体内和体外实验，利用基因芯片高通量的特点，初步探讨牛樟芝对肝癌细胞的体内外抑制作用和分子机制。

方法：

1.体内实验

(1)SMMC-细胞（4times;cell/只）接种至4～6周龄雄性BABL/c裸鼠右后肢皮下，建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型;

(2)造模成功裸鼠随机分为3组（10只/组）:生理盐水对照组，25mg/kgANCA-E-D实验组、50mg/kgANCA-E-D实验组，腹腔注射，每天1次，连续治疗21天;

(3)观察裸鼠的一般状况，测量各组裸鼠的体重、移植瘤体积等;血液学检测血清ALT和AST含量;病理切片HE染色检测移植瘤和肝肾组织，IHC检测移植瘤组织的MVD和PCNA的表达，TUNEL检测移植瘤组织的细胞凋亡。

2.体外实验

(1)0、20、40、60、80mg/LANCA-E-D处理SMMC-细胞24、48、72h，MTT法检测SMMC-细胞的增殖抑制率;

(2)0、20、40、60mg/LANCA-E-D处理SMMC-细胞24h，Hoechst及瑞氏染色观察细胞形态;

(3)0、20、40、60、80mg/LANCA-E-D处理SMMC-细胞24h，流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡;

(4)0、20、40、60mg/LANCA-E-D处理SMMC-细胞24h，基因芯片检测差异基因的表达;

结果：

　　体内实验:ANCA-E-D可抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，抑制裸鼠移植瘤中微血管的形成以及PCNA的表达，诱导移植瘤细胞的凋亡;ANCA-E-D对移植瘤裸鼠的ALT和AST无影响。

　　体外实验:20～80mg/L剂量之间的ANCA-E-D可显著抑制人肝癌SMMC-细胞的增殖;Hoechst及瑞氏染色发现，ANCA-E-D处理后SMMC-细胞出现凋亡形态改变;FCM周期检测发现，ANCA-E-D可在一定程度上影响SMMC-细胞周期进程;FCM凋亡检测发现，ANCA-E-D处理后，SMMC-细胞凋亡呈浓度依赖性增加。基因芯片检测发现，ANCA-E-D3个剂量组中，共同上调的基因有个，共同下调的基因有个。GO功能分析，这些基因涉及细胞信号转导、迁移、粘附、凋亡、分化、代谢、增殖、血管生成、器官发育等多方面。与凋亡相关的4倍以上的差异基因中，ANCA-E-D20mg/L组筛选6个，40mg/L组筛选出12个，60mg/L组筛选出35个。Pathway分析，3个剂量组中的差异基因均参与的信号通路包括TNFsignalingpathway、Calciumsignalingpathway、Pathwaysincancer、PI3K-Aktsignalingpathway、MAPKsignalingpathway、Jak-STATsignalingpathway、Apoptosis等。

结论：

　　牛樟芝提取物ANCA-E-D具有体内外抗肝癌作用，其作用机制可能是通过影响EDNRA、HRK、LCN2和ANGPTL4等基因的表达，进而影响包括凋亡在内的诸多信号通路来实现的。

牛樟芝，作为台湾特有的物种，在药用、保健领域发挥越来越重要的作用，作为台医院将指日可待；随着牛樟芝应用领域的不断扩大和安全性的有效提高，牛樟芝成为人们必不可少的养生保健产品不是没有可能。

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